BCA法（bicinchoninic acid）是一种常用的测蛋白质浓度的方法，本文介绍了BCA法蛋白质定量的原理,优缺点,以及BCA的实验流程。
1.BCA法原理
BCA法基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。
2.BCA法优缺点分析
优点
缺点
①.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg；②.不易受一般浓度去污剂的干扰，抗干扰能力强。③.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
①.可受螯合剂，高浓度还原剂的影响。
3.BCA法实验流程
①标准曲线的绘制：取一块酶标板，按下表加入试剂。
孔号
蛋白标准溶液（μL）
去离子水（μL）
对应蛋白含量（μg）
0
0
20
0
1
1
19
0.5
2
2
18
1.0
3
4
16
2.0
4
8
12
4.0
5
12
8
6.0
6
16
4
8.0
7
20
0
10.0
②根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。
③各孔加入200μL BCA工作液。
④把酶标板放在振荡器上振荡30s，37℃放置30min，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
⑤稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30min后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值。
⑥根据所测样品的吸光值，利用计算公式计算出蛋白样品的实际浓度（单位：μg/μL）。
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